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鋸緣青蟹簡稱青蟹，是我國浙江、福建和廣東等東南沿海省份的主要養(yǎng)殖品種，因其肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富，經(jīng)濟(jì)價值高而得到持續(xù)快速發(fā)展，產(chǎn)值達(dá)幾十億元。"黃水病"（亦稱白水病、白漿病）是目前青蟹養(yǎng)殖發(fā)展中的主要疾病之一，其發(fā)病范圍廣、死亡率高，給養(yǎng)殖青蟹造成重大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約了青蟹養(yǎng)殖的健康發(fā)展。該病主要表現(xiàn)為病蟹蟹體消瘦，肌肉白濁，打開蟹蓋可見到不同程度的土黃色或濁白色牛奶狀液體等癥狀。

　　自該病發(fā)生以來，不少研究者對其發(fā)病原因進(jìn)行研究，但結(jié)果各不相同，其病原至今仍有較大的爭議，紀(jì)榮興等1998報道非液化摩拉氏菌是"黃水病"的病原，毛之娟等2001曾報道辛辛那提弧菌等是"黃水病"的病原，宋振榮等1998認(rèn)為病毒是肌肉壞死"黃水病"的病原，而韓新全等則認(rèn)為環(huán)境因素是誘發(fā)" 黃水病"的根本原因。筆者通過大量取樣發(fā)現(xiàn)，所有"黃水病"病蟹的血淋巴和組織中均可發(fā)現(xiàn)大量的寄生原蟲，經(jīng)過病原、組織病理、電鏡觀察以及分子生物學(xué)方法研究，確定血卵渦鞭蟲Hematodinium.sp是引起養(yǎng)殖青蟹"黃水病"的重要病原。現(xiàn)將調(diào)查的初步情況報告如下，希望能為該病的診斷和防治提供科學(xué)依據(jù)。

　　1、流行情況

　　該病主要發(fā)生在南方沿海養(yǎng)殖鋸緣青蟹當(dāng)中，在浙江的象山港、三門灣和樂清灣一帶，包括三門、玉環(huán)、樂清、寧海、象山等地每年均有不同程度的發(fā)生，并往往呈暴發(fā)性流行趨勢，流行率通常在30%～50%左右，平均死亡率達(dá)20%，病情重的圍塘，死亡率可達(dá)60%～70%以上，個別塘甚至出現(xiàn)絕產(chǎn)，給養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來極大損失。該病通常病情發(fā)展緩慢，從發(fā)病到死亡往往持續(xù)較長時間，但具有傳染性，發(fā)病率和死亡率高。初步研究發(fā)現(xiàn)，其流行與季節(jié)、溫度、鹽度等環(huán)境因子、個體大小及性別等可能存在一定的關(guān)系。主要發(fā)生在每年的6月份～10月份的夏秋季節(jié)，其中以7～9月高水溫期為發(fā)病流行高峰，尤其是在溫鹽度環(huán)境變化較大的梅雨季節(jié)和臺風(fēng)季節(jié)，會在短時間內(nèi)出現(xiàn)死亡高峰。另外，小個體較大個體成活率高，雄性個體較雌性個體死亡嚴(yán)重。鹽度較低的地區(qū)如杭州灣沿岸的慈溪、余姚等地尚未見發(fā)生。

　　2、發(fā)病癥狀

　　患"黃水病" 病蟹通常攝食下降或停止攝食，行動遲緩，嚴(yán)重者往往爬到塘堤或涂面上死亡。病蟹蟹體消瘦，體色暗淡，關(guān)節(jié)膜處呈黃色或濁白色，部分附肢關(guān)節(jié)的外殼呈粉紅色，步足關(guān)節(jié)失去彈性、易脫落。剖開步足或大螯，可見肌肉以感染輕重而出現(xiàn)不同程度的白濁液化;打開蟹蓋，可見肝胰腺模糊呈紅棕色或乳白色，腸胃空，鰓呈土黃色或黑褐色，個別病蟹的鰓并發(fā)黑鰓病;甲殼腔內(nèi)的血液由正常時的藍(lán)青色具較強(qiáng)凝聚性轉(zhuǎn)變?yōu)槌实�黃色或濁白色牛奶狀不能凝固的變性液體。

　　組織病理觀察發(fā)現(xiàn)所有"黃水病"病蟹的血淋巴急劇下降，代之以大量的寄生原蟲。病蟹的肝胰臟、心臟、足部肌肉以及鰓等部位亦均充滿上述寄生原蟲，而作為對照組健康青蟹的各器官組織中則未發(fā)現(xiàn)有寄生蟲，表明該寄生蟲與青蟹的"黃水病"有密切的關(guān)系。病蟹在發(fā)病中后期，由于寄生蟲的大量寄生，導(dǎo)致血淋巴數(shù)量急劇下降，并表現(xiàn)出濁白色和不能凝聚等癥狀;同時其各重要組織器官均發(fā)生嚴(yán)重病變，生理功能喪失，進(jìn)一步導(dǎo)致病蟹死亡。

　　3、病原形態(tài)與分子生物學(xué)特性

　　用1ml注射器先吸取10%海水甲醛固定液0.1ml，再從青蟹圍心腔內(nèi)抽取等量血淋巴液混勻，將固定的血淋巴滴少許于玻片上，蓋上蓋玻片，于顯微鏡下觀察可見血淋巴急劇下降，代之以大量的寄生原蟲。從不同"黃水病"病蟹的乳白色液體中可以發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育階段的蟲體，多數(shù)呈卵圓形，有單核、雙核或多核期，大小約5～10多微米不等，也可見帶2條鞭毛的孢子階段。分離到的不同階段蟲體與Stentiford所描述的其他甲殼類中寄生的血卵渦鞭蟲的營養(yǎng)體、多核原生質(zhì)體以及帶鞭毛的孢子體形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征極為相似。

　　取病蟹血淋巴，采用Hudson等1994的血卵渦鞭蟲 Hematodiniurn.sp特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1.5%的瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果發(fā)現(xiàn)"黃水病"病蟹的血淋巴樣品均能擴(kuò)增出 680bp左右的條帶，而對照的健康蟹血淋巴樣品則沒出現(xiàn)條帶。根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的測序結(jié)果，可以確定該寄生蟲為一種血卵渦鞭蟲 Hemarodiniurn.sp，初步認(rèn)定其是引起養(yǎng)殖鋸緣青蟹"黃水病"的重要病原。

　　4、感染途徑

　　根據(jù) Shield（1994）等研究，血卵渦鞭蟲在甲殼類體內(nèi)寄生階段的生活史大致包括3個階段，即營養(yǎng)體階段、多核原生質(zhì)階段及無性繁殖階段（孢子生殖），通過孢子生殖會產(chǎn)生孢子母細(xì)胞，進(jìn)一步發(fā)育形成兩種大小形態(tài)相異的帶鞭毛具有運(yùn)動性的腰鞭孢子階段（大腰鞭孢子和腰鞭孢子）。成熟的腰鞭孢子通過口部的甲殼開裂處釋放到水體，并能在海水中存活幾天時間。根據(jù)1998年Appleton等的離體培養(yǎng)結(jié)果，其可能進(jìn)一步發(fā)育成為營養(yǎng)體。

　　有關(guān)血卵渦鞭蟲確切的感染和傳播途徑。Shields等認(rèn)為在大多數(shù)海產(chǎn)甲殼類的寄生腰鞭蟲中，腰鞭孢子很可能是感染期，但目前尚不清楚其是否可能產(chǎn)生休眠孢子或存在其他中間宿主。研究表明人工注射感染病蟹的血淋巴（包括營養(yǎng)體和腰鞭孢子）能成功感染健康蟹類。但Cachon（1987）利用自由游動的腰鞭孢子浸浴健康梭子蟹卻未能感染成功。類似于許多其他甲殼類原生動物，同類相食可能是某些宿主間傳播的有效方式。Sheppard等（2003）通過投喂病蟹的方法，在Calllnectessapidus上獲得投喂感染的成功。另外，深海枝角類等餌料生物也有可能是寄生蟲的中間宿主，因?yàn)樵谶@些餌料生物中也檢測到了類血卵渦鞭蟲的存在。Meyers等（1996）發(fā)現(xiàn)，血卵渦鞭蟲可能通過性傳播，其存在于一些雄性個體輸精管的精液里，但需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

　　對發(fā)病情況的調(diào)查結(jié)果顯示，該病與養(yǎng)殖環(huán)境存在較大關(guān)系，圍塘老化、養(yǎng)殖密度高、水交換條件差的池塘容易發(fā)病，尤其是在臺風(fēng)、暴雨等環(huán)境突變時導(dǎo)致養(yǎng)殖水體鹽度、pH值、水溫異常變化，青蟹往往由于強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，免疫抗病力下降，導(dǎo)致"黃水病"及并發(fā)病的流行。

　　5防治建議

　　目前尚無有效的治療藥物。必須堅持"以防為主、綜合治理"的原則予以預(yù)防，建議現(xiàn)階段應(yīng)從病原控制、苗種質(zhì)量、環(huán)境優(yōu)化以及養(yǎng)殖青蟹抗病力提高等方面著手，采取積極有效的措施，控制疾病的發(fā)生和蔓延：

　　1、做好放養(yǎng)前的清塘、消毒工作：池塘老化、環(huán)境污染嚴(yán)重，是導(dǎo)致各類病害多發(fā)的主要原因，必須做好放養(yǎng)前的清淤消毒工作，以控制和消滅病原，切斷傳播途徑。

　　2、選擇健康苗種：放養(yǎng)健壯和不帶病原的苗種是養(yǎng)殖生產(chǎn)成功的基礎(chǔ)。必須選擇體質(zhì)健壯、無傷病、規(guī)格較大的種苗，并經(jīng)檢疫和消毒后才能放養(yǎng)。

　　3、加強(qiáng)養(yǎng)殖管理、優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境：控制放養(yǎng)密度、合理投喂餌料、科學(xué)管理水質(zhì)，通過采取物理、化學(xué)、生物和生態(tài)方法進(jìn)行養(yǎng)殖環(huán)境的調(diào)控優(yōu)化，以控制疾病的發(fā)生。

　　4、減少應(yīng)激、提高機(jī)體抗病力：應(yīng)激原過于強(qiáng)烈，或持續(xù)的時間較長，往往使機(jī)體的免疫機(jī)能和抵抗力下降從而易受病原體的感染。應(yīng)盡量減少應(yīng)激因子，包括環(huán)境突變、污染以及人為的各種操作等原因可能對養(yǎng)殖青蟹造成的應(yīng)激反應(yīng);投喂優(yōu)質(zhì)飼料、添加免疫激活劑（如多維、免疫多糖、VitC，VitE等），提高機(jī)體的免疫力和抗病力。

　　5、開展配合飼料研究與推廣應(yīng)用：檢測發(fā)現(xiàn)，作為青蟹主要飼料來源的小蝦蟹亦是黃水病病原的攜帶者，鮮活飼料極有可能是疾病的一個感染途徑，同時鮮活餌料的大量投喂也是影響?zhàn)B殖底質(zhì)、導(dǎo)致水質(zhì)環(huán)境惡化的主要因素，應(yīng)積極開展人工配合飼料的研制與推廣應(yīng)用。

　　6、加強(qiáng)監(jiān)測，防止病原擴(kuò)散：黃水病是一種危害較大的流行性疾病，應(yīng)對該病的發(fā)生情況進(jìn)行監(jiān)測，一旦發(fā)現(xiàn)疾病，應(yīng)及時采取措施控制病原的傳播與擴(kuò)散，病蟹及尸體應(yīng)作消毒深埋或銷毀處理，以免進(jìn)一步傳染。同時必須注意藥物的濫用。

　　7、加強(qiáng)疾病傳播途徑及養(yǎng)殖技術(shù)研究：一方面進(jìn)一步摸清疾病的感染途徑，從源頭上控制病原的發(fā)生和蔓延;另一方面，要開展健康養(yǎng)殖技術(shù)研究，探索適合青蟹產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的高效健康養(yǎng)殖模式，從根本上杜絕該類疾病的發(fā)生。